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如何正确的保温才能让酶联免疫试剂盒的效果好
点击次数:46 发布时间:2019-07-28
 
在酶联免疫实验中中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后。但在这之间我们需要把握的是一个温度,那就是如何正确的保温,才能让酶联免疫试剂盒的效果达到zui佳!  
酶联免疫属固相免疫测定,抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例,加入板孔中的标本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会,只有zui贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。  
这是一个逐步平衡的过程,因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么酶联免疫反应总是需要一定时间的温育。  
温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立酶联免疫方法作反应动力学研究时,实验表明,两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时,产物的生成可达顶峰。  
为加速反应,可提高反应的温度,有些试验在43℃进行,但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底,在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过夜,以形成zui多的沉淀。但因所需时间太长,在酶联免疫中一般不予采用。  
若用保温箱,酶联免板应放在湿盒内,湿盒要选用传热性良好的材料如金属等,在盒底垫湿的纱布,zui后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度,特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴还是湿盒温育,反应板均不宜叠放,以保证各板的温度都能迅速平衡。
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